O trabalho apostólico do Opus Dei no Brasil teve início em 1957, em Marília, Estado de São Paulo. Devido ao interesse e à prolongada insistência do então bispo dessa diocese, D. Hugo Bressane de Araújo, São Josemaria Escrivá decidiu que fosse erigido um primeiro Centro do Opus Dei no Brasil, nessa jovem cidade da Alta Paulista.

Neste mesmo ano, abriu-se também em Marília o primeiro Centro feminino. Entre outras vieram iniciar o trabalho do Opus Dei no Brasil Gabriela Malvar Fonseca (professora), Rosário Alonso (nutricionista) e Maria Clara Constantino (professora de filosofia).

Conforme já estava projetado desde o começo, em 1958 iniciaram o trabalho apostólico do Opus Dei na cidade de São Paulo, primeiro utilizando-se de um pequeno apartamento na Rua Piauí, emprestado por um amigo; e pouco depois, desde fevereiro de 1959, num Centro sediado em casa alugada – a Residência Universitária do Pacaembu, Rua Gabriel dos Santos, nº 370 – , que foi erigido com a vênia do cardeal D. Carlos Carmelo de Vasconcellos Motta. Da mesma forma, um ano depois, em maio de 1960 foi erigido um Centro feminino, a Residência Universitária Jacamar, que teve sua primeira sede à Rua Gabriel Monteiro da Silva, nº 613.

Um marco decisivo para o desenvolvimento do trabalho apostólico do Opus Dei foi a estadia em São Paulo de São Josemaria Escrivá, entre 22 de maio e 7 de junho de 1974. Muitas pessoas tiveram a oportunidade de conhecê-lo e ouvi-lo em encontros de catequese, que chegaram a reunir mais de 3.000 participantes no Parque Anhembi, e perto de 2000 no Auditório Mauá. No dia 28 de maio, São Josemaria, acompanhado por numerosos fiéis do Opus Dei, cooperadores e amigos, realizou uma romaria ao Santuário Nacional de Nossa Senhora Aparecida.

Com o incentivo de São Josemaria e as bênçãos de Deus, a partir de 1975, o trabalho estável do Opus Dei foi-se estendendo rapidamente pelo país, com variadas iniciativas de caráter cultural, social e apostólico iniciadas no Rio de Janeiro, Curitiba, Brasília, Porto Alegre, Belo Horizonte, Campinas, Londrina, Niterói, São José dos Campos e Ribeirão Preto, sendo que, em várias outras cidades, há fiéis do Opus Dei que promovem atividades formativas, sociais e apostólicas de diversos tipos.